组培污染是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的污染，在培养容器内滋生大量的菌斑，培养材料不能正常生长和发育的现象。

细菌污染的特点是菌斑呈粘液状物，在接种两三天即可观察的到。

真菌污染的特点是污染部分长有不同颜色的霉菌，在接种后一周内即可观察到明显的菌丝生长。

造成污染的原因及对策：

1、外植体消毒不彻底，材料带菌

    外植体经过灭菌后，并不一定完全将微生物杀死，有相当多的材料仍是带菌的，这些个体在培养几天后就开始长菌，需要及时地进行检查和淘汰。智科组培建议您在做外植体时首先要选择合适的消毒剂和消毒时间，尽可能的将外植体处理干净。其次是试验尽可能的每瓶接种1个材料，这样会降低交叉感染的概率。另外在种源有限时，也可对污染的材料采取二次灭菌的办法，但灭菌时间和消毒剂需根据前期试验记录和材料的状态进行调整。最后，对于部分难消毒的材料可以考虑使用抑菌剂进行处理以提高成功概率。

2、培养基或者操作器具灭菌不彻底

    分装完的培养基需要在121℃消毒20min左右，此过程中的灭菌效果取决于灭菌时的温度及高温持续的时间。如果出现灭菌温度不够或高温持续时间不够，在培养基表面往往会产生细菌性的污染。因此在使用高温压力容器进行灭菌时，应该设定好相应的参数，并全程观察各参数是否正常，出现异常情况要及时找出问题所在，避免造成损失。另外如果是小型手动灭菌设备，一定要根据要求严格执行手动排气程序，杜绝因人为失误造成的污染。最后如果条件允许，最好将灭完菌的培养基置于洁净的房间内放置3--5天观察无污染后再使用。

接种用的器具除了使用前要经过高温灭菌外，在接种的过程中，每使用一次，需要及时利用器械灭菌器、酒精灯火焰等进行灭菌处理。

3、接种过程中人员操作引起的污染

    在接种过程中因人为的因素引起污染的情况比较常见，而且有时候会造成比较严重的后果。人为因素引起的污染主要体现在个人卫生、接种手法、无菌理念等多方面影响。首先接种人员应注意个人卫生，特别是手要认真清洗，并用75％酒精进行消毒，在接种的过程中，不要触碰无关物品且还要经常用酒精擦手。其次，接种人员应当熟练掌握操作技术，做到操作娴熟。同时在接种过程手不要在灭过菌的接种用具和揭开的培养瓶上方移动，插苗时，要将瓶子适当倾斜，以避免手上的微生物垂直落人瓶子内。再次，应严守无菌操作理念对于需要继代转接的培养物，放人超净工作台之前，要用酒精擦拭，在操作区内，不要放入过多的待用培养基，避免洁净的空气流被遮挡。（请参阅 《洁净组培室日常人员管理及要求》 ）

4、环境因素引起的污染

    组培过程中，由环境因素造成的污染也不容小觑。这也是净化工程在组培上推广的主要原因。环境因素主要包括环境湿度、环境污染源、空间消毒等几个方面。首先，应将环境湿度控制在60%---70%，如果湿度过大，应该使用除湿机进行除湿处理（此点对于南方梅雨季节时尤为重要）。其次是污染源的控制，应严格控制实验室及周围的粉尘。根据菌尘共生理论控好尘埃的量就会控制好环境中菌落的含量。另外对于污染的组培材料，绝不能就地清洗，否则会引起大量的真菌孢子在空气中弥漫和繁殖。必须在高压灭菌锅内，彻底杀死各种微生物后再进行清洗。最后，要定期对空间进行消毒，一般使用组培专用臭氧发生器进行空间消毒处理。也可使用高锰酸钾和福尔马林进行熏蒸，这种方法效果也不错，但对人体有一定的危害。此外实验室整体的卫生管理也是必不可少的工作。

5、超净工作台造成的污染

    这种情况一般不常见，但确有个例发生。因此我们需要定期对初过滤器进行清洗和更换（建议根据使用环境3---6个月清洗或更换一次），对内部的超净过滤器，不必经常更换（初效过滤器按规定操作的话，理论上3---5年更换一次）。但保险起见需要每隔一定时间进行一次菌落试验，发现问题及时更换。另外在每次使用时应提前15～20min开风机和紫外进行预处理，并对操作台面用75％的酒精进行喷雾消毒。

    以上是造成组培污染的一些常见问题和解决措施，当然造成组培污染的因素绝不仅仅是这几种。组培的污染是多方面问题，诸如像是瓶盖没有仔细清洗这样细节的不注意最后都可能会造成巨大的损失。因此智科组培在此提醒您应该将无菌操作理念贯穿于整个组培操作流程中，仔细、仔细再仔细的将污染防控做到实处，以避免不必要的损失。

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